期刊简介

心肺血管病杂志

本刊是以心肺血管病的预防、医疗、科研和国际学术交流为主要内容的专业性学术季刊，国内外公开发行。读者对象为从事心肺血管病工作的高、中级专业工作人员。本刊登载的内容包括浒学及人群防治、临床论著、基础研究、吸烟与健康、短篇报道、病例报告、临床病理讨论、讲座、述评、科普栏、综述、学术动态及学术活动纪要等栏目。

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杂志名称：心肺血管病杂志
主管单位：北京市卫生局
主办单位：北京市心肺血管疾病研究所；首都医科大学附属北京安贞医院
国际刊号：82-636
国内刊号：1007-5062
出版周期：月刊

期刊荣誉：中国期刊全文数据库(CJFD)期刊收录：维普收录(中), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 上海图书馆馆藏, 万方收录(中)

心肺血管病杂志2016年第07期

CRISPR/Cas9基因编辑系统中两种gRNA活性检测方法比较

刘燕；任卫红；王绿娅；张晓萍；高诗娟；武威；李凤娟；杜杰

关键词：CRISPR/Cas9, gRNA活性, Surveyor/T7E1检测, 体外检测

摘要：目的:比较CRISPR/Cas9系统中gRNA活性检测的两种方法,即利用Surveyor/T7E1核酸酶检测方法或利用Cas9蛋白的体外检测方法.方法:一方面构建表达Cas9和特异gRNA的质粒,转染NIH3T3细胞,然后提取DNA,利用T7E1核酸内切酶检测gRNA介导Cas9切割靶DNA并产生indel突变的效率;另一方面,设计引物并利用PCR扩增出gRNA的DNA模板片段,通过体外转录获得gRNA,利用Cas9蛋白及gRNA进行体外反应检测切割效率.结果:利用Cas9蛋白体外酶切可以检测到较高的gRNA活性,然而通过T7E1核酸酶方法检测gRNA在细胞中活性整体偏低,且在不同基因之间差异较大.结论:细胞Surveyor/T7 E1法与Cas9蛋白体外酶切法检测到的gRNA活性不完全一致,体外活性检测法不能替代.

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